ИММУНОФЕНОТИПИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА МЕЖКЛЕТОЧНЫХ КОММУНИКАЦИЙ ИНТАКТНЫХ КЕРАТИНОЦИТОВ ПРИ СЕПСИСЕ

Полный текст

Сепсис остается одной из ведущих причин (клаудин-1, окклюдин) [2, 3]. Согласно проведен-смерти среди пациентов отделений реанимации ным исследованиям плотные контакты играют важи интенсивной терапии. Несмотря на прогресс ную роль в дифференцировке эпидермиса [11]. в изучении патогенеза системного воспаления В эксперименте на мышах с дефицитом клаи усовершенствовании методов терапии крити- удина-1 было выявлено выраженное нарушение ческих состояний, летальность при сепсисе со- эпидермального барьера, приводящее к обезвохраняется на неопределенно высоком уровне - живанию и гибели животных. Это объясняется 30-90 %. Отечественные и зарубежные клинико- мутацией в гене кодирующего клаудин-1, который эпидемиологические исследования описывают приводит к потере белка, что характерно для влияние значительного количества факторов ихтиоз а. При некоторых других кожных заболена течение и исходы сепсиса. ваниях также происходят структурные измене- Эмпирически установлено, что сепсис нару- ния белков и локализации плотных контактов. шает сохранность функций кожи и угнетает ее за- При псориазе отмечали увеличение экспрессии живление. Однако механизмы данных изменений окклюдина, ZO по сравнению со здоровой кожей [6]. мало описаны или носят гипотетический характер. Аналогичный эффект наблюдали при инфициро- В настоящем исследовании мы рассмотрим вании кожи патогенными бактериями [9]. Комбинароль межклеточных коммуникаций, а именно плот- торное или постмутационное действие окклюдина ных контактов, расположенных преимущественно и клаудина-1 изменяет функцию плотных контактов в поверхностных слоях эпидермиса и обеспечи- и усиливает эффект параклеточного барьера [5]. вающих вторичный барьер [13]. Несмотря на то, что существует определенное Данные межклеточные контакты образованы понимание возникающего дисбаланса белков межкомплексом трансмембранных и внутриклеточных клеточных коммуникаций при ряде инфекционных белков, которые располагаются непосредственно и других поражений кожи экзогенного происхождепод цитолемой и герметизируют субплазмолем- ния, но отсутствуют исследования возможных мальное пространство кератиноцитов шиповатого структурных перестроек этих белков на фоне (zonula occludens, ZO) и других слоев эпидермиса эндогенного поражения - при сепсисе, учитывая, что при этом происходит активная продукция и секреция интерлейкинов, оказывающих мутагенное действие на кератиноциты. ЦЕЛЬ РАБОТЫ Дать иммуногистохимическую оценку межклеточных коммуникаций (клаудин-1, окклюдин, ZO) эпидермиса при сепсисе. МЕТОДИКА ИССЛЕДОВАНИЯ Работу проводили на 40 архивных парафиновых блоках фрагментов кожи. На основании анамнестических, клинических и морфологических данных были сформированы две группы. I группа (n = 30) -аутопсийный материал кожи умерших пациентов с установленным патологоанатомическим основным диагнозом: тяжелый бактериальный сепсис, синдром полиорганной недостаточности согласно консенсусу ACCP/SCCM. Критерии включения: возрастной интервал 18-45 лет, клинически и морфологически верифицированные признаки гипоперфузии внутренних органов, повышение сывороточного лактата >4 ммоль/л, олигурия, нарушение сознания. Критерии исключения: беременность, установленное онкологическое заболевание, нозокомиальная этиология сепсиса, наследственные и приобретенные заболевания с поражением кожи и/или соединительной ткани (синдром Марфана, синдром Элерса - Данлоса, ревматоидный артрит, системная красная волчанка, склеродермия, анкилозирующий спондилит, псориаз, фолликулярный гиперкератоз и др.), хроническое заболевание печени, хроническая почечная недостаточность, иммуносупрессивная и гормональная терапия, патология системы гемостаза в анамнезе. II группа (n = 10) - аутопсийный материал кожи контрольной группы пациентов, умерших по причинам, не связанным с инфекционным заболеванием. Критерии включения: возрастной интервал 18-45 лет, отсутствие клинически и морфологически верифицированных признаков гипоперфузии внутренних органов. Критерии исключения: перенесенный сепсис, беременность, установленное онкологическое заболевание, наследственные и приобретенные заболевания с поражением кожи и/или соединительной ткани (синдром Марфана, синдром Элерса - Данлоса, ревматоидный артрит, системная красная волчанка, склеродермия, анкилози-рующий спондилит, псориаз, фолликулярный гиперкератоз и др.), хроническое заболевание печени, хроническая почечная недостаточность, иммуно-супрессивная и гормональная терапия, патология системы гемостаза в анамнезе. Иммуногистохимическое исследование проводили по стандартному протоколу в автоматическом режиме в иммуногистостейнере Bond-Max («Leica», Германия). Первичные антитела к клаудин-1 (Clone 2H10D10), окклюдин (Clone OC-3F10) и ZO (Clone R40.76); вторичные - универсальные антитела (HiDef Detection™ HRP Polymer system, «Cell Marque», США). Характер иммуногистохими-ческих реакций оценивали, используя полуколи-чественную шкалу по 3-балльной системе с подсчетом количества иммунопозитивных клеток в 10 случайно отобранных полях зрения светового микроскопа при увеличении *400 (в %): «-» отсутствие, «+» слабая (5-25 % клеток), «++» умеренная (25-50 % клеток), «+++» выраженная (>51 % клеток). Полученные образцы визуализировали на светооптическом микроскопе Leica DM 4000 B («Leica», Германия), совмещенном с видеокамерой и программным обеспечением. Полученные в результате подсчета данные обрабатывали с использованием компьютерной п рограммы SPSS 7.5 for Windows statistical software pa ckage (IBM Analytics, США). РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ Настоящее исследовании посвящено изучению плотных межклеточных контактов (клаудин-1, окклюдин и ZO) интактной кожи в условии системного воспаления. По данным литературы известно, что при сепсисе происходит функциональная перестройка плотных соединений. Так, в легких и кишке изменения структуры и локализации изучаемых белков приводят к нарушению барьерной функции, увеличению проницаемости (отеку) [8]. В печени изменяется локализация ZO и окклюдина, приводящая к гепатобилиарной дисфункции, сопровождаясь холестатической желтухой, а в почках наблюдали мутацию экспрессии гена ZO, проявляющуюся острой почечной недостаточностью [4]. Во всех исследуемых образцах кожи пациентов при сепсисе отмечали изменение имму-номечения (целостности) плотных межклеточных контактов по сравнению с контрольной группой (табл.). Результаты иммуногистохимических реакций с белками межклеточных коммуникаций в интактном слое эпидермиса при сепсисе (доля иммунопозитивных клеток, %) Белок Эпидермис при сепсисе (I группа) Здоровая кожа (II группа) Claudin-1 64,1 ± 1,1 87,2 ± 2,4 Occludin 18,3 ± 2,1 24,3 ± 1,8 ZO 19,5 ± 1,4 21,1 ± 2,5 Клаудин-1-позитивную мембранную ИГХ-реак-цию наблюдали во всех слоях эпидермиса, с уменьшением окрашивания от базального к зернистому слою: в I группе она была в 1,35 раза меньше, чем в здоровой коже (рис. 1). Во многих работах показана важнейшая роль клаудина-1 в регуляции эпидермального барьера, а уменьшение его концентрации сопровождается обезвоживанием и нарушением местного гомеостаза [7]. При сепсисе активируются провоспали-тельные цитокины (в первую очередь IL-1p и др.), которые снижают количество клаудина-1, и, как следствие, увеличивается доля макрофагов и автономная продукция IL-1p кератиноцитами, которые еще больше усиливают воспалительную инфильтрацию - то есть формируется «порочный круг». Кроме того, усилению локального воспаления способствует нарушение первичного и вторичного эпидермальных барьеров, а также нарушение дифференцировки кератиноцитов [12]. Напротив, на поздних стадиях системного воспаления наблюдается незначительное повышение клаудина-1, что оказывает компенсаторное действие, характеризующееся угнетением иммунной системой и снижением секреции цитокинов макрофагами [10]. Снижение интенсивности окрашивания отмечали с окклюдином, где в эпидермисе пациентов с сепсисом оно было уменьшено в 1,2 раза по сравнению с образцами контрольной группы (рис. 2). Обнаруженное уменьшение интегрального белка окклюдина, комбинаторно взаимодействующего с клаудином-1 для обеспечения эффективного параклеточного барьера, в условиях систем-ног о воспаления ослабляет межклеточный барьер и тем самым усиливает проницаемость интра-целлюлярного пространства [7, 14]. ЛоглрСа (ЩойглТОЩ): Положительная ИгХ-реакция на ZO была диффузной и практически тождественной в эпидермисе обоих групп (рис. 3). Диффузное иммуномечение ZO интактного эпидермиса при системном воспалении не показывает существенные изменения. Тем не менее, увеличение поляризации кератиноцитов приводит к нарушению его связывания с интегральными белками и образованию плотных соединений, о чем свидетельствуют проведенные ранее исследования [1]. ЗАКЛЮЧЕНИЕ Снижение количества белков плотных соединений (клаудин-1, окклюдин, ZO), играющих важную роль в селективной проницаемости эпидермиса и контролирующих межклеточный поток биологически активных веществ, вызывает незначительные структурные изменения, проявляющиеся нарушением местного гомеостаза и эпидермальной барьерной дисфункцией.

Об авторах

Е. Ю Шаповалова

Медицинская академия имени С.И. Георгиевского ФГАОУ ВО «Крымский федеральный университет им. В.И. Вернадского»

Григорий Александрович Демяшкин

Первый Московский государственный медицинский университет им. И.М. Сеченова

Email: dr.dga@mail.ru
к. м. н., доцент кафедры патологической анатомии им. академика А.И. Струкова

М. Ю Маланичев

Медицинская академия имени С.И. Георгиевского ФГАОУ ВО «Крымский федеральный университет им. В.И. Вернадского»; Клиника пластической хирургии и косметологии «Фрау Клиник»

Д. А Погосян

Медицинская академия имени С.И. Георгиевского ФГАОУ ВО «Крымский федеральный университет им. В.И. Вернадского»; Клиника пластической хирургии и косметологии «Фрау Клиник»

В. И Щекин

Первый Московский государственный медицинский университет им. И.М. Сеченова

Список литературы

Дополнительные файлы