Том 19, № 4 (2019)

При проведении нейробиологических исследований важным представляется подбор наиболее адекватных и информативных методов, одним из которых является иммуногистохимическое исследование. В статье кратко обобщен многолетний опыт работы сотрудников лаборатории функциональной морфологии центральной и периферической нервной системы ФГБНУ ИЭМ, связанный с адаптацией современных методов иммуногистохимии для изучения нервной системы. Цель работы состояла в определении наиболее эффективных и надежных иммуномаркеров, которые целесообразно использовать при проведении нейробиологических исследований. Статья содержит теоретические сведения о важнейших цитоспецифичных и функциональных нейробиологических маркерах, применяемых в исследованиях структурно-функциональной организации головного и спинного мозга млекопитающих животных и человека, а также практические рекомендации по их использованию. В частности, представлены результаты постановки иммуногистохимических реакций на нейральные маркеры (NeuN, белки нейрофиламентов, альфа-тубулин, альфа-синуклеин), ферменты синтеза нейромедиаторов (тирозингидроксилаза, глутаматдекарбоксилаза, холинацетилтрансфераза, NO-синтаза), глиальные маркеры (GFAP, глутаминсинтетаза, Iba-1, виментин). Описанная методология перспективна для использования в экспериментальной нейробиологии и клинико-морфологической диагностике.

Цель — разработать алгоритм обработки базы данных проспективного нерандомизированного исследования Assessment of Myocardial Ischemic-Reperfusion (AMIRI) — CABG (ClinicalTrials.gov Identifier: NCT03050489) в программном пакете SAS Enterprise Guide 6.1, позволяющий сравнивать различные показатели по группам наблюдения.

Материалы и методы. В проспективное нерандомизированное исследование AMIRI — CABG в ПСПбГМУ им. И.П. Павлова с 2016 по 2019 г. включено 336 пациентов. Создана база данных с результатами клинических, лабораторных и инструментальных исследований. Статистическая обработка данных выполнена с помощью лицензионного программного обеспечения SAS Enterprise Guide 6.1. Независимые группы сравнивали с использованием теста множественных сравнений с поправкой Бонферрони, а также теста Краскела – Уоллиса и Манна – Уитни с поправкой на множественные сравнения.

Результаты. Разработан алгоритм обработки данных проспективного нерандомизированного исследования AMIRI — CABG для сравнения различных показателей по независимым группам наблюдения с применением тестов параметрической и непараметрической статистики. Данный алгоритм может быть использован врачами различных специальностей и научными сотрудниками для обработки результатов научных или клинических исследований.

Заключение. Алгоритм обработки базы данных научного исследования позволит врачам и научным сотрудникам упростить и ускорить анализ результатов исследований. SAS Enterprise Guide 6.1 предоставляет возможности для качественной и быстрой обработки больших массивов данных.

Цель исследования — оценить роль HIF-1α в антидепрессивных эффектах гипоксического посткондиционирования в экспериментальной модели депрессии «выученная беспомощность» у крыс.

Материалы и методы. Исследования проведены в модели депрессивноподобного расстройства «выученная беспомощность» на крысах. Развитие патологии оценивали в поведенческом тесте «открытое поле», а также по базальному уровню кортикостерона в плазме крови крыс. Поведенческие нарушения корректировали путем применения трехкратного гипоксического посткондиционирования (360 мм рт. ст., 2 ч). Изменение иммунопозитивности HIF-1α и эритропоэтина в гиппокампе крыс исследовали количественным иммуногистохимическим методом. Ингибитор трансляции HIF-1α топотекан (1 мг/кг, внутрибрюшинно, Santa Cruz, США) вводили на 4-й день после стресса, депрессивноподобное поведение крыс оценивали на 9-й постстрессорный день.

Результаты. Показано, что посткондиционирование, осуществленное за три сеанса умеренной гипобарической гипоксии, приводило к коррекции поведенческого дефицита и уровня кортикостерона в крови у крыс в данной модели, что сопровождалось повышением количества HIF-1α и эритропоэтина в дорзальном и вентральном гиппокампе. Введение ингибитора HIF-1α крысам усиливало поведенческие проявления «выученной беспомощности» в тесте «открытое поле».

Заключение. Представлены экспериментальные данные, свидетельствующие о вероятном вовлечении HIF-1 и эритропоэтина в эндогенные процессы компенсации патогенного действия стрессоров психоэмоциональной природы и антидепрессивные эффекты гипоксического посткондиционирования.

Исследование посвящено изучению влияния индивидуальных психологических особенностей личности авиационных специалистов на переносимость гипобарической гипоксии умеренной степени, моделируемой в условиях барокамеры. Исследование включало оценку физиологических (артериальное давление, частота сердечных сокращений, сатурация артериальной крови, индекс Руфье) и психофизиологических показателей (критической частоты слияния световых мельканий, сложной сенсомоторной реакции, показателей субъективной оценки состояния) в зависимости от уровня нейротизма, степени экстраверсии и уровня личностной тревожности.

Было установлено, что функциональное состояние организма испытуемых с высоким уровнем нейротизма в условиях гипобарической гипоксии изменяется значительнее, чем у испытуемых с низким уровнем нейротизма, что подтверждается снижением самочувствия на 17,5 %, настроения на 9 % (p < 0,01) и активности на 16,9 % (p < 0,05), увеличением времени сложной сенсомоторной реакции на 12,6 % (p < 0,01), а также более выраженными функциональными изменениями сердечно-сосудистой системы.

Изменения некоторых физиологических показателей у экстравертов имели большую отрицательную динамику в условиях гипоксии. Так, индекс Руфье увеличился в группе интровертов на 30-й и 60-й минутах и после подъема на 97,3; 98,6 и 15,1 % соответственно против увеличения на 118,2; 123,6 и 16,4 % в группе экстравертов. В группе экстравертов время сложной сенсомоторной реакции после окончания исследования увеличилось на 8,0 % (p < 0,05), критическая частота слияния световых мельканий по сравнению с показателями, полученными до подъема, повысилась на 5,2 % (p < 0,05).

Функциональное состояние испытуемых с высоким уровнем личностной тревожности имело более выраженную отрицательную динамику в условиях гипобарической гипоксии, что подтверждают достоверно более высокие значения индекса Руфье в группах с высоким уровнем личностной тревожности при фоновом исследовании на 30-й и 60-й минутах и после подъема; увеличение времени сложной сенсомоторной реакции к 45-й минуте на 6,1 % (p < 0,05), а после барокамерного исследования — на 9,5 % (p < 0,01); снижение показателей самочувствия к 40-й минуте пребывания в барокамере на 20,3 % (p < 0,01), активности на 18,8 % (p < 0,05) и настроения на 13,7 % (p < 0,01).

Таким образом, при оценке переносимости умеренных степеней гипоксии необходимо учитывать зависимость изменений функционального состояния организма от индивидуальных психологических особенностей.

Целью исследования настоящей работы являлось изучение в эксперименте эффективности стандартной антидотной терапии и терапии димефосфоном в отношении метаболического ацидоза с высокой анионной разницей при отравлении крыс этиленгликолем. В задачи исследования входили моделирование острого отравления этиленгликолем у крыс, проведение экспериментальной терапии антидотом этанолом в сочетании с натрия гидрокарбонатом и терапии димефосфоном, сравнение эффективности препаратов в отношении показателей нарушения кислотно-основного состояния и функции почек.

Материалы и методы. Этиленгликоль вводили крысам-самцам линии Вистар массой тела 190–210 г внутрижелудочно в дозе 6 мл/кг однократно через атравматический зонд. Животные были разделены на группы по 6 особей в каждой: интактные (негативный контроль), отравление этиленгликолем (позитивный контроль), этиленгликоль + стандартная антидотная терапия, этиленгликоль + терапия димефосфоном. Экспериментальную терапию проводили в течение первых 24 ч с помощью стандартной антидотной терапии при введении этанола (2 мл/кг внутрибрюшинно в виде 30 % раствора через 1, 4, 6, 12, 18 ч) и натрия гидрокарбоната (6 мл/кг в виде 4 % раствора 3 раза в первые сутки), а также димефосфона (150 мг/кг внутрибрюшинно три раза в первые сутки). Суточную мочу собирали на 3-и сутки после отравления в обменных клетках. Измеряли концентрацию креатинина в пробах мочи и сыворотки крови, рассчитывали клиренс креатинина. В образцах венозной крови через 24 ч терапии определяли величину рН, уровень натрия, калия, кальция, магния, хлоридов, гидрокарбонатов, лактата, бета-3-гидроксибутирата, альбумина, мочевины и креатинина (измеренные параметры). Вычисляли AG (анионную разницу), ∆рН, ∆AG, ∆HCO₃, ∆AG/∆HCO₃ и ∆Gap (расчетные параметры). Для погибших животных определяли причину смерти. Данные обрабатывали с использованием программы GraphPad Prism 6.0 (США).

Результаты. Острое отравление крыс этиленгликолем приводит к развитию токсической энцефалопатии и нефропатии, метаболического ацидоза с высокой анионной разницей, обусловленной наличием метаболитов, а также лактат-кетоацидоза вследствие торможения функций центральной нервной системы. Все животные, получавшие этиленгликоль в дозе 12 мл/кг, погибли на 3-и сутки. В сочетании с гипермагнезиемией метаболический ацидоз оказывал кардиодепрессивный эффект, что наряду с прямыми нефротоксическим и нейротоксическим воздействиями способствовало развитию смешанного варианта танатогенеза и смерти. Смерть наступила от токсической энцефалопатии и нефропатии, вызванных прямым нефротоксическим и нейротоксическим действием этиленгликоля и его метаболитов. При отравлении этиленгликолем в дозе 6 мл/кг экспериментальная терапия этанолом в сочетании с гидрокарбонатом натрия ограничивала ацидотический сдвиг рН крови, лактат-ацидоз и кетоацидоз, повышение уровня мочевины, но не влияла на уровень гидрокарбонатов (р = 0,048), креатинина и его клиренс (р = 0,037), анионную разницу (р = 0,033). Терапия димефосфоном в дозе 450 мг/кг в сутки предотвращала снижение клиренса креатинина и уровня гидрокарбонатов в крови, ограничивала увеличение активности лактатдегидрогеназы, оказывала более выраженное действие в отношении анионной разницы и ∆AG (р = 0,042), но не влияла на развитие гипокальциемии (р = 0,0076) и гипоальбуминемии (р = 0,021).

Заключение. Острое отравление этиленгликолем приводит к развитию смешанного варианта танатогенеза с поражением центральной нервной и мочевыделительной систем, а также сердца. Вскрытие и гистопатологическое исследование подтвердили причину гибели животных. По сравнению с эффектами стандартной антидотной терапии препарат димефосфон в большей степени способствовал коррекции метаболического ацидоза (как измеренных, так и расчетных его маркеров, p < 0,05). Терапия димефосфоном предотвращала снижение клиренса креатинина. Сравнительный анализ двух методов коррекции ацидоза у крыс при остром отравлении этиленгликолем показал, что димефосфон оказывал более выраженное действие в отношении маркеров метаболического ацидоза и почечной недостаточности.

Цель — провести анализ изменений концентрации и активности белков, которые участвуют в обмене железа, при моделировании у крыс гипергликемии, вызванной стрептозотоцином.

Материалы и методы. Измерены концентрация и активность трансферрина и церулоплазмина, концентрация глюкозы, фруктозамина, гемоглобина, ферритина, железа в образцах крови крыс после инъекции стрептозотоцина и у животных, которым вводили натрий-фосфатный буфер. Для отработки условий иммуноферментного анализа были получены высокоочищенные препараты церулоплазмина, трансферрина и ферритина, а также антитела к ним.

Результаты. Развитие гипергликемии у крыс после инъекции стрептозотоцина подтверждено увеличением концентрации глюкозы и фруктозамина в крови. Обнаружено повышение концентрации церулоплазмина и снижение его удельной ферроксидазной активности, а также снижение концентрации трансферрина и ферритина у крыс с гипергликемией. Однако отсутствие различий в концентрации железа и железосвязывающей способности сыворотки крови между группами животных свидетельствует о компенсаторной реакции.

Заключение. Вызванная с помощью стрептозотоцина гипергликемия у крыс характеризуется изменениями активности и концентрации белков, участвующих в обмене железа, однако следует отметить, что гомеостатическая реакция нивелирует выявленные изменения. Изменения концентрации церулоплазмина и трансферрина сопоставимы с таковыми при острой фазе воспаления.

Цель — исследовать клеточную и тканевую локализацию интерлейкина-17 (IL-17) в различных атеросклеротических поражениях артерий человека и на основании полученных данных выдвинуть гипотезу о возможной роли T-хелпера 17 (Th17) клеток в дестабилизации атеросклеротической бляшки.

Материалы и методы. На аутопсийном материале с помощью гистологических, иммуногистохимических и морфометрических методов исследования были изучены сегменты аорты, коронарных артерий и a. basilaris с различными типами атеросклеротических поражений (43 образца ткани). В образцах ткани изучали эндотелиальные и мононуклеарные клетки, экспрессирующие IL-17.

Результаты. Показано, что эндотелиальные клетки интимы способны секретировать IL-17 во всех типах атеросклеротических поражений. Одновременно было выявлено увеличение числа мононуклеарных клеток, экспрессирующих IL-17, в интиме артерий. Максимальное число клеток, экспрессирующих IL-17, наблюдалось в интиме нестабильной атеросклеротической бляшки, особенно часто в районе разрыва ее покрышки, что может свидетельствовать о провоспалительном действии Th17-клеток и секретируемого ими IL-17 и о существенном влиянии их на формирование нестабильных атеросклеротических поражений.

Заключение. На основании полученных данных впервые удалось выдвинуть гипотезу о возможной роли Th17-клеток в дестабилизации атеросклеротической бляшки.