Разработка и валидация методики ВЭЖХ-масс-спектрометрического определения нового производного вальпроевой кислоты и 1,3,4-тиадиазола в плазме крови кроликов для фармакокинетических исследований

Цель исследования. Разработка и валидация методики ВЭЖХ-масс-спектрометрического определения нового производного вальпроевой кислоты и 1,3,4-тиадиазола в плазме крови кроликов. Материал и методы. Объектом исследования явился М-(5-этил-1,3,4-тиадиазол-2-ил)-2-пропилпентанамид (вальпразоламид) -новое противоэпилептическое средство из группы тиадиазоловых производных вальпроевой кислоты. Определение вальпразоламида в плазме крови кроликов осуществляли с помощью высокоэффективного жидкостного хроматографа Agilent 1260 Infinity II (Agilent Technologies, Германия). В качестве детектора использовали тройной квадрупольный масс-спектрометр ABSciex QTrap 3200 MD (ABSciex, Сингапур) с электрораспылительным источником ионов (TurboV с зондом Turbo Ion Spray). Для разработанной методики оценивали селективность, перенос пробы, линейность, правильность, прецизионность, матричный эффект, степень извлечения вальпразоламида. Результаты. Разработана методика ВЭЖХ-масс-спектрометрического определения вальпразоламида в плазме крови кроликов (аналитическая колонка Phenomenex Synergi C18 4 мкм 2,0x50 мм, градиентное элюирование: 0-1 мин 10%-ный водный раствор ацетонитрила; 1-3 мин линейное повышение концентрации ацетонитрила в смеси до 90%; 3-4 мин изократический участок с концентрацией ацетонитрила 90%; 4-5 мин кондиционирование колонки 10%-ным раствором; скорость потока подвижной фазы - 0,6 мл/мин; объем вводимой пробы - 20 мкл; общее время градиентного элюирования - 5 мин; масс-спектрометрическое детектирование). Условия масс-детектирования: положительная поляризация, напряжение электроспрея 5500,0 В, потенциал декластеризации 41,0; давление газа завесы 20,0 psi, газа распыления - 40,0 psi, потенциал ввода 3,5 В. MRM-переходы для вальпразоламида составили m/z256,1 → m/z130,1 и m/z81,0. В качестве внутреннего стандарта использовали ацетазоламид (m/z 223,1 → m/z73,0). Выводы. Аналитический диапазон методики определения вальпразоламида составляет 1-1000 нг/мл. Разработанная методика является селективной, точной, прецизионной и линейной, по всем параметрам соответствует требованиям по валидации био-аналитических методик.

ВЭЖХ-МС/МС, вальпроевая кислота, 1,3,4-тиадиазол, противоэпилептические средства, масс-спектрометрия