Остаточное содержание белка в биообразцах плазмы крови лабораторных животных (кроликов) после подготовки проб к анализу методом ВЭЖХ-УФ
- Авторы: Косман В.М1, Карлина М.В1
-
Учреждения:
- ЗАО «Санкт-Петербургский институт фармации»
- Выпуск: Том 23, № 10 (2020)
- Страницы: 53-58
- Раздел: Статьи
- URL: https://journals.eco-vector.com/1560-9596/article/view/112791
- DOI: https://doi.org/10.29296/25877313-2020-10-08
- ID: 112791
Цитировать
Полный текст
Открытый доступ
Доступ предоставлен
Доступ платный или только для подписчиков
Аннотация
Актуальность. Основное ограничение чувствительности ВЭЖХ-УФ-методик, широко используемых для анализа лекарственных веществ в биологических образцах (плазме крови, тканях и органах), связано со значимым фоновым влиянием матриц биообразцов. Осаждение белков считают наиболее простым, универсальным и результативным способом подготовки биообразцов к ВЭЖХ-анализу. Однако сведения об эффективности применяемых способов осаждения белков и уровне их остаточного содержания в анализируемых биопробах в доступной литературе ограничены. Цель работы. Оценка остаточного содержания белка в биообразцах плазмы крови лабораторных животных (кроликов) после подготовки проб к анализу методом ВЭЖХ-УФ. Материал и методы. На примере плазмы крови кроликов после подготовки образцов к дальнейшему анализу, включающей осаждение кислыми растворами, ацетонитрилом и метанолом, оценено остаточное содержание белка спектрофотометрическими методами. Результаты. Показано, что метод Бредфорд позволяет получить более низкие по абсолютному значению результаты по сравнению с методом прямой спектрофотомерии. При использовании различных осадителей и их соотношений и двух режимов центрифугирования остаточное содержание белка, определённое по методу Бредфорд, составило примерно 0,02-0,4 мг/мл, что свидетельствует о практически полном осаждении белков (более 99,5%) и подтверждает корректность использования осадительной пробоподготовки для дальнейшего анализа проб методом ВЭЖХ-УФ. Наиболее предпочтительным с точки зрения минимального остаточного содержания белка является применение в качестве осадителя ацетонитрила; наибольший уровень белка обнаружен в пробах после обработки 15%-ным раствором хлорной кислоты, то есть применение этого осадителя наименее желательно для дальнейшего ВЭЖХ-анализа. Выводы. Осаждение является эффективным способом очистки биообразцов от белков, выявленные особенности применения различных осадителей могут быть использованы при создании биоаналитических методик, основанных на ВЭЖХ-анализе.
Ключевые слова
Полный текст
Об авторах
В. М Косман
ЗАО «Санкт-Петербургский институт фармации»
Email: kosmanvm@doclinika.ru
к.фарм.н г.п. Кузьмоловский, Всеволожский р-н, Ленинградская обл.
М. В Карлина
ЗАО «Санкт-Петербургский институт фармации»к.б.н г.п. Кузьмоловский, Всеволожский р-н, Ленинградская обл.
Список литературы
- Косман В.М., Карлина М.В. Пожарищам О.Н. Влияние условий пробоподготовки и режима хроматографирования на уровень фонового сигнала при ВЭЖХ-УФ-анализе плазмы крови. Ведомости НЦЭСМП. 2020; 2: 121-128.
- Poison С., Sarkar P., Incledon В., Raduvaran V., Grant R. Optimization of protein precipitation based upon effectiveness of protein removal and ionization effect in liquid chromatography-tandem mass spectrometry. Journal of Chromatographyro. 2003; 785 (2): 263-75.
- Alshammari T.M., Al-Hassan A.A., Hadda T.B., Aljofan M. Comprasion of different serum sample extraction metods and their suitability for mass spectrometry analysis. Saudi pharmaceutical journal. 2015; 63: 689-687.
- Косман B.M. Карлина M.B., Макарова M.H. Опыт разработки биоаналитических методик методом ВЭЖХ с УФ-детектированием. Фармация. 2020; 69(3): 23-35.
- Досон Р., Элиот Д., Элиот У., Джонс К. Справочник биохимика: Пер. с англ. М.: Мир, 1991: 544 с.
- ОФС. 1.2.3.00012.15 Определение белка. Государственная Фармакопея Российской Федерации. XIV изд. М.: МЗРФ, 2018; Т. 1-4: 7019 с.
- Krohn R.I. The Colorimetric Detection and Quantitation of Total Protein. Current Protocols in Cell Biology. 2002; 15: A.3H.1-28.
- Majors R.E. Sample preparation fundamentals for chromatography. Agilent Inc: Canada. 2013: 364 p.
- Phree™. Phospholipid removal solutions. General Protocol. Phenomenex, USA, 2013: 12 p.
- Blanchard J. Evaluation of the relative efficacy of various techniques for deproteiniing plasma samples prior to high-performance liquid chromatographic analysis. J. of Chromatogr. 1981; 226: 455-60.
- Суховская И.В., Боровинская Е.В., Смирнов Л.П., Немова Н.Н. Сравнительный анализ методов определения концентраций белка - спектрофотометрии в диапазоне 200-220 нм и по Бредфорд. Труды Карельского научного центра РАН. 2010; 2: 68-71.
- Varga М. Textbook of rabbit medicine. Butterworth-Heinemann. 2013: 512 p.
Дополнительные файлы
