Том 23, № 1 (2023)

Понимание того, каким образом формируются очаговые атеросклеротические поражения в сосудистой стенке, в настоящее время остается явно неполным, и прежде всего оттого, что обсуждение указанного вопроса как правило рассматривается на этапе, когда липопротеины низкой плотности уже находятся в интиме; ситуация во многом проясняется, если внимание уделить в первую очередь механизмам инфильтрации интимы данными липопротеинами. С современной точки зрения речь идет о молекулярных механизмах трансцитоза, обнаруженного ранее электронно-микроскопически на эндотелиоцитах капилляров крыс, которым вводили наночастицы золота или ферритина, чтобы проследить их путь в цитоплазме. Трансцитоз как процесс активный, в реализации которого участвует ряд рецепторов, противопоставляется пассивной инфильтрации сосудистой стенки липопротеинами. Помимо указанных концепций в обзоре рассматриваются возможные условия реализации трансцитоза липопротеинов низкой плотности, а также проблемы регуляции трансцитоза.

Обоснование. Нейротрофический фактор BDNF выполняет важные функции обеспечения синаптической пластичности и функциональной активности нейронов, участвует в стрессовом ответе организма и патогенезе стресс-зависимых заболеваний. Специфику его постстрессорных изменений в мозге в связи с генетически детерминированными особенностями возбудимости нервной системы не изучали.

Цель — определить уровень мРНК bdnf в префронтальной коре, гиппокампе и миндалине крыс двух линий с контрастной возбудимостью нервной системы в норме и в разные сроки после длительного эмоционально-болевого стрессорного воздействия (через 24 ч, 7, 24, 60 сут).

Материалы и методы. Исследование проводили на взрослых самцах крыс линий с высоким и низким порогом возбудимости нервной системы. В качестве модели хронического стресса использовали длительное эмоционально-болевое воздействие по схеме К. Гехта. Определение уровня мРНК bdnf в трех отделах мозга контрольных и экспериментальных групп крыс двух линий в разные сроки после воздействия проводили методом количественной ПЦР в реальном времени.

Результаты. У высоковозбудимых крыс снижение экспрессии гена bdnf в префронтальной коре происходит через 24 ч и сохраняется до 7 сут после воздействия, в гиппокампе — через 2 мес. после воздействия. У крыс низковозбудимой линии изменений мРНК bdnf не обнаружено.

Заключение. У высоковозбудимых крыс длительное эмоционально-болевое стрессорное воздействие вызывает снижение экспрессии гена bdnf в префронтальной коре и гиппокампе. У низковозбудимых крыс изменений уровня мРНК данного нейротрофина не обнаружено ни в одной из исследованных областей мозга. Обсуждается возможная связь выявленной специфики изменений уровня мРНК bdnf с большей выраженностью постстрессорных тревожно-подобных нарушений поведения у высоковозбудимых крыс по сравнению с низковозбудимыми.

Обоснование. Использование современных методов иммуногистохимии — необходимый атрибут любого исследования, касающегося клеточной биологии различных структурных компонентов органов пищеварительного тракта. Одним из наиболее трудновизуализируемых объектов среди них являются клетки Купфера — резидентные макрофаги печени, что определяет высокую актуальность разработки надежных методов их выявления.

Цель — разработать протокол иммуногистохимического исследования клеток Купфера в печени крысы с использованием двух первичных антител против Iba-1 (поликлональных козьих и моноклональных кроличьих) и проанализировать преимущества и недостатки используемого метода с учетом применения цинк-этанол-формальдегида в качестве фиксатора.

Материалы и методы. Исследование проводили в образцах печени половозрелых крыс (n = 5). Поликлональные козьи антитела к Iba-1 в разведении 1 : 1000 (ab5076, Abcam, Великобритания) и моноклональные кроличьи антитела к Iba-1 в разведении 1 : 800 (ET1705-78, HuaBio, Китай) использовали для светооптического исследования резидентных макрофагов печени.

Результаты. Протокол с использованием поликлональных козьих антител и специфических блокаторов позволил обнаружить клетки Купфера в исследованных образцах, но также давал неспецифическое фоновое окрашивание. Протокол с использованием моноклональных кроличьих антител позволил выявить клетки Купфера в образцах печени крысы с большой специфичностью и минимальным фоновым окрашиванием тканей печени. При использовании протокола с применением моноклональных кроличьих антител было выявлено больше Iba-1-иммунопозитивных структур (большее количество клеток на единицу площади при исследовании одного и того же участка печени для каждого случая), чем при использовании протокола с поликлональными козьими антителами. Фиксация с использованием цинк-этанол-формальдегида позволила выявить Iba-1-иммунопозитивные клетки во всех образцах печени крыс.

Заключение. На основании полученных данных был сделан вывод, что фиксация цинк-этанол-формальдегидом сохраняет антигенные свойства тканей, позволяя эффективно использовать различные антитела. Из рассмотренных протоколов иммуногистохимического окрашивания наиболее оптимальным является протокол с использованием моноклональных кроличьих антител.

Обоснование. Нарушение функциональной активности тромбоцитов приводит к прогрессированию атеросклероза и его осложнениям. Активированные тромбоциты прилипают к стенке сосуда в месте повреждения эндотелия и инициируют образование артериального тромба, что приводит к острой ишемии органа. Такие биохимические и клеточные маркеры как тромбоцитарные микровезикулы и Р-селектин могут быть проанализированы с помощью метода проточной цитометрии, в основе которого лежит специфическое взаимодействие антиген – антитело. Пациенты с облитерирующими заболеваниями артерий нижних конечностей подвергаются значительно большему риску сердечно-сосудистых и цереброваскулярных осложнений, чем лица в соответствующей по возрасту и полу популяции без заболеваний периферических артерий. Важная составляющая в патогенетической терапии сердечно-сосудистых заболеваний и профилактике их осложнений — применение антиагрегантов.

Цель — оценить уровень тромбоцитарных микрочастиц и экспрессии Р-селектина у пациентов с заболеваниями периферических артерий нижних конечностей на фоне приема антиагрегантной терапии.

Материалы и методы. В исследование было включено 49 человек. Из них были сформированы три группы: 1) пациенты с облитерирующим заболеванием артерий нижних конечностей (n = 14) на фоне длительного приема (более 14 дней) двойной (75 мг клопидогрела и 100 мг ацетилсалициловой кислоты) антиагрегантной терапии; 2) пациенты с COVID-19 (n = 15), которые составили группу положительного контроля при определении микрочастиц тромбоцитарного происхождения; 3) здоровые добровольцы (n = 20) без признаков острого респираторного заболевания, без сердечно-сосудистых и тромбоэмболических эпизодов в анамнезе, не принимавшие антиагрегантные препараты. Функциональную активность тромбоцитов оценивали двумя методами — с помощью оптической агрегатометрии и анализа экспрессии Р-селектина на поверхности тромбоцитов с использованием проточной цитометрии. Количество тромбоцитарных микрочастиц в плазме крови определяли также с помощью проточной цитометрии.

Результаты. При оценке функциональной активности тромбоцитов методом оптической агрегатометрии было выявлено значимое снижение степени агрегации тромбоцитов в группе пациентов с облитерирующими заболеваниями артерий нижних конечностей на фоне приема антиагрегантов по сравнению с группой контроля. Аналогичные изменения были получены при анализе экспрессии Р-селектина на поверхности тромбоцитов. При сравнительном анализе процентного содержания тромбоцитарных микрочастиц с фенотипом CD9⁺CD41⁺ было выявлено, что в группе пациентов с тяжелым воспалительным процессом их количество оказалось значительно больше, чем у пациентов с облитерирующими заболеваниями артерий нижних конечностей на фоне приема антиагрегантов и в контрольной группе.

Заключение. Проведенное нами исследование отражает согласованность результатов трех различных лабораторных тестов при оценке функциональной активности тромбоцитов у пациентов с облитерирующими заболеваниями артерий нижних конечностей на фоне приема антиагрегантных препаратов.