Том 22, № 4 (2022)

Статья посвящается выдающемуся ученому и деятелю отечественной эпидемиологии академику РАМН Виталию Дмитриевичу Белякову. Через призму событий последних лет — пандемий социально значимых инфекций — дано современное прочтение и подтверждение актуальности сформулированной ученым теории саморегуляции паразитарных систем. Рассмотрены и систематизированы эволюционно сложные и многообразные взаимоотношения между микробиотой и животным миром, ее весомая роль в установлении равновесия между многими эпидемическими процессами в человеческой популяции. Особое внимание уделено вопросам развития синдемии вируса иммунодефицита человека и SARS-CoV-2, а также последним наблюдениям за взаимодействием между возбудителем COVID-19 и вирусом гриппа. Приведены данные, отражающие наличие интерферирующих процессов между вирусом гриппа и SARS-CоV-2, когда в течение двух лет все выделяемые опасные штаммы SARS-CоV-2 препятствовали приходу сезонных эпидемий гриппа и других острых респираторных вирусных инфекций. В.Д. Беляков в определенном историческом формате опередил события, описав процессы саморегуляции микромира в условиях макро- и микросреды и ее развития, закономерности которых могут быть применены в дальнейшей перспективе.

Обоснование. Последние результаты исследований указывают на то, что в патогенезе атеросклероза у человека и экспериментальных животных существенную роль могут играть воспалительные клеточные реакции, с преобладанием в инфильтратах лимфоцитов и моноцитов/макрофагов, которые способствуют деструктивным процессам в сосудистой стенке. Однако сравнительного дифференцированного морфометрического анализа содержания мононуклеарных клеток в нестабильных и стабильных атеросклеротических поражениях осуществлено до сих пор не было.

Цель исследования — проведение сравнительного гистологического и морфометрического исследования количественного содержания лимфоцитов и макрофагов в нормальных участках сосудистой стенки, в липидных пятнах, в нестабильных и стабильных атеросклеротических поражениях.

Материалы и методы. В работе исследованы образцы, взятые во время 15 аутопсий умерших в возрасте от 56 до 71 года от острой сердечно-сосудистой недостаточности атеросклеротической этиологии. Проведено сравнительное гистологическое и морфометрическое исследование содержания мононуклеарных клеток: лимфоцитов и макрофагов в нормальных участках сосудистой стенки, в липидных пятнах, в нестабильных и стабильных атеросклеротических поражениях — всего 50 образцов ткани, окрашенных гематоксилином и эозином.

Результаты. Выявлено резкое увеличение содержания изучаемых клеток в интиме, атероматозном ядре и подлежащих участках адвентиции в нестабильных атеросклеротических бляшках. В нормальных участках сосудистой стенки, в начальных атеросклеротических поражениях и в стабильных бляшках численность макрофагов и лимфоцитов незначительна.

Заключение. В целом, полученные результаты хорошо согласуются с литературными данными и говорят в пользу необходимости лимфоцитов и макрофагов для формирования иммуновоспалительных реакций при образовании нестабильных атеросклеротических поражений у человека.

Обоснование. В соответствии с действующими регламентами доклиническую оценку эффективности плазмозаменителей для оказания помощи при острой кровопотере проводят преимущественно на крупных лабораторных животных (собаки, свиньи) с использованием широкого перечня методов оценки структурно-функционального состояния органов и систем биообъекта. Это требует больших затрат материальных средств и времени, что нецелесообразно на этапе скрининга эффективности вновь разрабатываемых инфузионных средств. В связи с этим актуальной задачей становится разработка стандартизованной модели острой кровопотери на мелких лабораторных животных для скрининговой оценки специфической активности инфузионных растворов, с последующим проведением исследований на крупных животных. В качестве биообъекта целесообразно использовать лабораторных крыс как наиболее подходящих из группы мелких лабораторных животных по сходству физиологических и лабораторных показателей с человеком.

Цель — разработать модель острой кровопотери на мелких лабораторных животных для скрининговой оценки специфической активности инфузионных растворов.

Материалы и методы. Эксперименты проведены на крысах линии Вистар массой 330 ± 41 г. Животные были распределены на 3 группы: 1-ю опытную (20 особей с моделированием острой кровопотери без лечения), 2-ю опытную (20 особей с моделированием острой кровопотери и ее восполнением Реополиглюкином), интактную (10 особей без моделирования кровопотери). Дизайн исследования включал: общее обезболивание (внутримышечное введение Zoletil 100 и Xylozin 2 % в соотношении 1 : 5 из расчета 0,01 мл на 1 кг веса); катетеризацию бедренной артерии с последующей управляемой аппаратной эксфузией крови со скоростью 0,5 мл/мин до установления стойкой (в течение 2 мин) артериальной гипотонии; аппаратный синхронный контроль среднего артериального давления (методом прямой тонометрии через контралатеральную бедренную артерию); расчет процента кровопотери от расчетного объема циркулирующей крови, равного 5 % веса животного, частоты сердечных сокращений (по электрокардиограмме) в течение первых 3 ч после эксфузии крови. В качестве тестового препарата служил Реополиглюкин, который вводили через артериальный бедренный катетер сразу после эксфузии крови в объеме и при скорости, эквивалентных объему и скорости эксфузии. Дополнительно для комплексной оценки механизмов поддержания показателей гемодинамики предложены индивидуальные динамические расчетные показатели для каждой особи: приведенный ударный объем крови и показатель эффективности инфузии.

Результаты. Все крысы в первой опытной группе погибли, из них 25 % через 17–20 мин после эксфузии крови, 75 % — в интервале от 45 до 90 мин. Инфузия Реополиглюкина снизила гибель животных до 35 % и отсрочила среднее время гибели до 45–55 мин. Однократная эксфузия крови у крыс приводила к потере 7–9 мл крови (46–51 % объема циркулирующей крови), что сопровождалось снижением среднего артериального давления и частоты сердечных сокращений. Компенсация уменьшения объема циркулирующей крови, в том числе за счет инфузии, проявлялась повышением указанных показателей. Признаком неэффективности компенсации считали незначительное повышение среднего артериального давления при динамически нарастающей частоте сердечных сокращений. Обосновано, что повышение значений расчетных показателей (приведенный ударный объем крови и показатель эффективности инфузии) является критерием эффективной компенсации гемодинамических нарушений, в том числе в результате инфузии препаратов гемодинамического действия.

Заключение. Модель острой кровопотери с расчетом приведенного ударного объема крови и показателя эффективности инфузии целесообразно использовать для оценки специфической активности инфузионных растворов при острой кровопотере.

Обоснование. Эндотелиальная дисфункция лежит в основе патогенеза многих социально значимых заболеваний. Поиск новых оригинальных препаратов для терапии этого состояния остается важной научно-практической задачей. Для гидролизата двустворчатых моллюсков из семейства мидий Mytilus edulis и его производных в разных модельных системах описаны противовоспалительные, антикоагулянтные и антиоксидантные эффекты.

Цель исследования — изучение влияния препарата гидролизата M. edulis на функциональную активность эндотелиальных клеток линии EA.hy926.

Материалы и методы. Жизнеспособность и метаболическую активность эндотелиальных клеток изучали в МТТ-тесте. Для исследования пролиферативной активности использовали тест с окрашиванием монослоя клеток кристаллическим фиолетовым. Оценку способности препарата нейтрализовать токсическое действие HOCl и H₂O₂ проводили с применением флуоресцентных красителей и проточной цитометрии.

Результаты. Было установлено, что гидролизат M. edulis не обладал цитотоксичностью и в разведениях от 1 : 10 до 1 : 60 достоверно повышал пролиферацию эндотелиальных клеток, обладал нейтрализующим действием в отношении HOCl и во всех исследуемых разведениях достоверно повышал жизнеспособность эндотелия. Препарат оказался неэффективным в отношении H₂O₂, а в присутствии максимальной исследуемой концентрации усиливал окислительное действие H₂O₂. В то же время противовоспалительного действия гидролизата M. edulis выявлено не было. Препарат не оказывал влияния на продукцию IL-8 и экспрессию адгезионной молекулы CD54 (ICAM-1) и тканевого фактора CD146 эндотелиальными клетками.

Заключение. Препарат гидролизата M. edulis усиливает пролиферацию эндотелиальных клеток и способен нейтрализовать окислительные эффекты HOCl.

Обоснование. Нейробластома — одна из часто встречающихся экстракраниальных солидных опухолей детского возраста. На современном этапе значительную роль в развитии новообразований отводят эпигенетическим нарушениям. Поскольку процесс эпигенетических изменений в клетке достаточно динамичен и обратим, то актуально выявление экзогенных веществ, способных влиять на эпигеном и которые могут быть использованы для эпигенетической таргетной терапии различных типов опухолей. Одним из таких потенциальных молекул является лактоферрин. В настоящее время описаны противоопухолевые свойства этого белка из семейства трансферринов, однако практически не известно о его влиянии на эпигеном клеток различных типов новообразований, в том числе нейробластомы.

Цель — исследовать влияние апо-формы экзогенного рекомбинантного лактоферрина человека на жизнеспособность и эпигеномный статус клеток нейробластомы IMR-32.

Материалы и методы. В работе исследованы клетки нейробластомы человека линии IMR-32 после 72 ч воздействия 8 доз рекомбинантного аполактоферрина человека: 0,1, 0,5, 1, 5, 10, 50, 100 и 500 мкг/мл. Проведена количественная оценка уровня полногеномного метилирования ДНК и степени компактизации хроматина в клетках IMR-32 с использованием коммерческих наборов 5-mC DNA ELISA Kit, Global DNA Methylation – LINE-1 Kit, а также ферментативного гидролиза MspI / HpaII и DNaseI.

Результаты. Обнаружено, что рекомбинантный аполактоферрин снижает жизнеспособность IMR-32 и в зависимости от дозы дифференциально влияет на уровень полногеномного метилирования ДНК (СpG-динуклеотидов, CCGG-сайтов, LINE-1-повторов) и степень компактизации хроматина. При этом наблюдается сложная картина эпигеномного клеточного ответа на воздействие аполактоферрина (нелинейная немонотонная зависимость доза – эффект).

Заключение. Предполагается, что аполактоферрин способен модулировать активность генов через эпигенетические механизмы, в частности изменяя паттерн метилирования ДНК и влияя на структуру хроматина, что может быть одним из молекулярных механизмов его противоопухолевого действия.

Л.А. Орбели — один из выдающихся отечественных физиологов, в разное время работавший в Отделе физиологии Императорского института экспериментальной медицины под руководством И.П. Павлова и в Петербургском Морском госпитале, возглавлял Отдел эволюционной физиологии Всесоюзного института экспериментальной медицины и Биостанцию в Колтушах (впоследствии Институт эволюционной физиологии и патологии высшей нервной деятельности АМН СССР). В годы сталинских репрессий активно выступал в защиту коллег-ученых, ходатайствуя об их освобождении. Скольких людей спас Л.А. Орбели в годы сталинского террора, сегодня не знает никто. Абгар Леонович (15.05.1939–20.12.2022), внук Леона Абгаровича, общественный и научный деятель, предполагал, что он спас не менее ста человек. Среди спасенных Орбели был и будущий нобелевский лауреат по физиологии или медицине Конрад Лоренц. Благодаря заступничеству Леона Абраговича суд над Е.М. Крепсом по обвинению в контрреволюционной деятельности завершился для ученого пятью годами исправительно-трудового лагеря, а не высшей мерой наказания. Благодаря ему же Крепс смог вернуться к научной деятельности. Подобная активность не могла остаться «безнаказанной», и после «Павловской» сессии Орбели был отовсюду уволен, но в 1956 г. он стал директором Института эволюционной физиологии им. И.М. Сеченова, который возглавлял до самой смерти в 1958 г. Л.А. Орбели был одним из первых отечественных правозащитников, для которого гуманистическая деятельность была не менее важной, чем научная. Статья написана на основе доклада старшего научного сотрудника Института экспериментальной медицины Е.Т. Захаровой «Орбели и его время», сделанного в Академии наук (СПб, Университетская набережная, д. 5) 07.07.2022 на семинаре, посвященном памяти академика Л.А. Орбели, приуроченном к 140-летию со дня рождения.