Медицинский академический журнал

Обоснование. Установлено, что новые производные ацексамовой кислоты — N-ацетил-6-аминогексаноат серебра и 2-этил-6-метил-3-гидроксипиридиния N-ацетил-6-аминогексаноат стимулируют регенерацию и минерализацию костной ткани при остеопорозе. Однако до настоящего времени остается не изученным влияние 2-этил-6-метил-3-гидроксипиридиния N-ацетил-6-аминогексаноата на особенности репаративного гистогенеза и взаимосвязь его стадий с уровнями факторов роста в регенерирующих тканях при восстановлении кожи после термического ожога.

Цель работы – морфологическая оценка динамики заживления ожоговых ран кожи у крыс и ее взаимосвязь с уровнями факторов роста (vascular endothelial growth factor и basic fibroblast growth factor) в регенерирующих тканях для характеристики репаративных свойств 2-этил-6-метил-3-гидроксипиридиния N-ацетил-6-аминогексаноата.

Материалы и методы. Работа выполнена на 63 нелинейных крысах, которым моделировали термический ожог по стандартной методике. Животным опытной группы на ожоговую рану ежедневно наносили 2 % мазь с 2-этил-6-метил-3-гидроксипиридиния N-ацетил-6-аминогексаноатом, животным контрольной группы 1 ожог не обрабатывали, контрольной группы 2 — ежедневно наносили мазевую основу. Морфологические исследования регенерирующих тканей из зоны ожога проводили на 7, 14 и 21-е сутки эксперимента после стандартной пробоподготовки. Концентрацию факторов роста в гомогенатах регенерирующих тканей определяли методом иммуноферментного анализа.

Результаты. В фазу воспаления активная продукция и высвобождение из клеток vascular endothelial growth factor морфологически сопровождалась ранним неоваскулогенезом в грануляционной ткани и достоверными различиями показателей ее толщины у крыс опытной группы. В фазу пролиферации активация размножения и дифференцировки фибробластов ассоциирована с возрастанием уровня basic fibroblast growth factor и сохранением повышенного уровня vascular endothelial growth factor во всех группах, но особенно высоким он был у крыс опытной группы. Фаза эпителизации сопровождалась статистически значимым снижением содержания basic fibroblast growth factor и vascular endothelial growth factor в регенерирующих тканях кожи в 1,9 и 1,8 раза соответственно в сравнении с контрольными группами.

Заключение. Установлено, что 2 % мазь с 2-этил-6-метил-3-гидроксипиридиния N-ацетил-6-аминогексаноатом обладает репаративным потенциалом, о чем свидетельствует ускоренное сокращение как площади ожоговых дефектов, так и средних сроков их заживления в опытной группе по сравнению с контрольными.

Обоснование. Рассеянный склероз — хроническое нейродегенеративное аутоиммунное заболевание, характеризующееся наличием очагов воспаления и демиелинизации в центральной нервной системе. Запуск патологических процессов при рассеянном склерозе обусловлен сложным взаимодействием генетических факторов, неблагоприятных факторов среды и эпигенетическими влияниями. Прогрессирующая неврологическая симптоматика вследствие нарушений аксональной проводимости, гибели аксонов и нейродеструкции приводит к значительному ухудшению качества жизни пациентов и инвалидизации. Поиск новых маркеров для совершенствования методов диагностики и терапии, в том числе с учетом генетического профиля и эпигенетических взаимодействий, является актуальной задачей.

Цель — исследование изменений экспрессии мРНК DNMT1 у пациентов с рассеянным склерозом с разной продолжительностью заболевания, анализ метилирования промоторной области гена DNMT1 и сопоставление изменений в уровне экспрессии DNMT1 с содержанием гомоцистеина в крови и наличием полиморфизмов генов, кодирующих синтез ключевых ферментов фолатного цикла.

Материалы и методы. Уровень экспрессии мРНК DNMT1 в периферических мононуклеарных клетках крови оценивали методом обратной транскрипции с последующей полимеразной цепной реакцией, для анализа метилирования промотора DNMT1 использовали метод флуоресцентной полимеразной цепной реакции с метил-чувствительным анализом кривых плавления с высоким разрешением. Содержание гомоцистеина в крови определяли методом иммунохемилюминесцентного анализа. Для генотипирования по полиморфизмам генов фолатного цикла использовали метод полимеразной цепной реакции в реальном времени, для дискриминации аллелей применяли флуоресцентные зонды с LNA-модификациями.

Результаты. Показано, что у пациентов с рассеянным склерозом, в том числе в дебюте заболевания, уровень экспрессии мРНК DNMT1 достоверно ниже, чем у добровольцев контрольной группы. Связи между снижением экспрессии DNMT1 и уровнем метилирования промотора обнаружено не было. Выявленная сильная положительная взаимосвязь между уровнем экспрессии мРНК DNMT1 и содержанием гомоцистеина у пациентов с рассеянным склерозом и наличие сочетанного влияния генотипов по полиморфизмам A2756G гена MTR и C677T гена MTHFR на экспрессию DNMT1 позволяет предполагать, что генетически обусловленные особенности метаболизма фолатов могут способствовать нарушению эпигенетической регуляции при рассеянном склерозе.

Заключение. Полученные результаты указывают на перспективность исследований, направленных на выявление факторов, обусловливающих эпигенетические изменения при рассеянном склерозе. Изучение механизмов, определяющих вклад полиморфных вариантов генов фолатного цикла в патогенез рассеянного склероза, — один из возможных путей совершенствования диагностических и терапевтических подходов.

Обоснование. Первой линией защиты хозяина против инвазии вирусных патогенов служит врожденный иммунный ответ, наиважнейшее звено которого — система интерферонов. Передача сигналов интерфероном индуцирует в клетке-мишени экспрессию широкого спектра специфических противовирусных белков, так называемых интерферон-стимулируемых генов. Наиболее эффективные интерферон-стимулируемые гены напрямую ингибируют репликацию вирусов РНК-центричным образом посредством деградации вирусной РНК, нарушения ее транспорта, ингибирования вирусной трансляции и т.п.

Цель — разработка количественной тест-системы на основе полимеразной цепной реакции для оценки молекулярной регуляции интерферон-стимулируемых генов MxA, OAS1 и PKR человека, а также определение экспрессии этих генов в лейкоцитах крови в ответ на инфицирование РНК-содержащими вирусами.

Материалы и методы. Исследование проводили с использованием лейкоцитов, выделенных из крови пациентов с лабораторно подтвержденными заболеваниями грипп и COVID-19 на 3–4-й день после манифестации болезни. Для ex vivo индукции вирусного инфицирования использовали вирусы гриппа A/California/07/09pdm (H1N1pdm09), B/Malaysia/2506/04 (Викторианской генетической линии), штамм A2 респираторно-синцитиального вируса и вирус SARS-CoV-2 hCoV-19/Russia/SPE-RII-3524V/2020.

Результаты. Разработана мультиплексная тест-система на основе полимеразной цепной реакции для оценки экспрессии генов MxA, OAS1 и PKR, эффективность амплификации которых составила 101,9, 92,5 и 101,5 % соответственно. Разработанная тест-система была предложена для исследования молекулярной регуляции MxA, OAS1 и PKR в лейкоцитах при социально значимых заболеваниях, таких как грипп и COVID-19. Согласно полученным нами результатам у госпитализированных пациентов на 3–4-й день после появления симптомов заболевания уровни экспрессии генов MxA, OAS1 и PKR были значимо повышены на системном уровне в лейкоцитах крови. Показано, что стимуляция лейкоцитов, выделенных от здоровых волонтеров, вирусами гриппа А, B и респираторно-синцитиальным вирусом приводила к значимому увеличению уровней мРНК генов MxA, OAS1 и PKR через 24 ч после инфицирования. В то же время стимуляция лейкоцитов вирусом SARS-CoV-2 не приводила к изменению экспрессии этих генов.

Заключение. Разработанную тест-систему можно использовать для характеристики экспрессии противовирусных эффекторных интерферон-стимулируемых генов, что потенциально поможет в изучении эволюционно выбранных механизмов ускользания вирусов от врожденного иммунного ответа.

Установлено, что причина биологической смерти плода при мертворождениях и неонатальных энцефалопатий при живорождениях — гипоксическое повреждение клеток головного мозга. Своевременное кесарево сечение остается самым эффективным способом сохранения жизни и здоровья плода при смертельно опасной внутриутробной гипоксии. Однако отсутствует общепризнанная методика оценки резервов адаптации плода к гипоксии и методика выбора вида родоразрешения с целью своевременного применения кесарева сечения при необходимости. Применяемая с 1952 г. оценка по шкале Апгар позволяет оценить состояние здоровья новорожденных через 1 и 5 мин после рождения, но эта оценка осуществляется без учета состояния здоровья плода перед родами. В последние годы было установлено, что исход внутриутробной гипоксии плода определяется не только ее продолжительностью, но и величиной имеющихся у плода адаптационных резервов к гипоксии. Обнаружено, что показатель устойчивости плода к гипоксии — продолжительность его неподвижного состояния при апноэ беременной женщины. В 2011 г. в России был разработан способ оценки устойчивости плода к внутриутробной гипоксии на основе теста Штанге. Максимальная продолжительность неподвижного состояния плодов при апноэ их матерей в норме превышает 30 с, при наличии у плодов признаков фетоплацентарной недостаточности не достигает 30 с, а при тяжелой фетоплацентарной недостаточности не достигает 10 с. Поэтому было предложено рассматривать хорошую устойчивость плода к гипоксии как показание к вагинальным родам, а низкую устойчивость плода к гипоксии — как показание к кесареву сечению. Приводится описание методики оценки устойчивости плода к гипоксии, разработанной для использования каждой беременной самостоятельно. Для этого ей достаточно иметь секундомер и уметь регистрировать максимальный период неподвижности своего плода в период добровольного апноэ. Выражается надежда на то, что показатель устойчивости плода к гипоксии может стать весомым дополнением к показателю здоровья новорожденного по шкале Апгар. Предполагается, что использование модифицированного теста Штанге может помочь врачам в предотвращении мертворождений и неонатальных энцефалопатий.